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| 舉例大腸桿菌菌種活化的方法和詳細步驟 | |||
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菌種的活化就是將處于保藏狀態的菌種放入合適的培養基中進行培養，逐級增大培養是為了得到純而壯的培養物，可以理解為就是為了獲得活力旺盛的、接種數量足夠的培養物進行培養。菌種發酵一般情況下需要2-3代的復壯過程，因為保存時的條件往往和培養時的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應培養環境
中藥標準對照品研究中心建議實驗要明白菌種活化的情況就首選需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國際和國內常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃ 冰箱凍結法、液氮超低溫凍結法。
對于不同的保存方式活化的方式也不同：
1 定期移植法的菌種復蘇較簡單，直接轉接即可；
2 液體石蠟法保存的菌種在復蘇時，挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上，生長繁殖后，再重新轉接一次；
3 沙土管法保存菌種在復蘇時，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養基上，長出菌落后再轉接一次。或取沙土粒于適宜的液體培養基中，增殖培養后再轉接斜面；
4 真空冷凍干燥法保存菌種在復蘇時先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱， 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，用無菌水或培養液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養基上，進行適溫培養；
5 -80℃ 冰箱凍結法保存菌種復蘇時，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當快速搖動。直到內部結冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養
6 液氮超低溫凍結法保存菌種復蘇與-80℃ 冰箱凍結法保存菌種復蘇相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養。
總結一下菌種活化需要以下幾個步驟：
第一配置菌種適宜生長的培養基
第二將菌種從保藏狀態恢復到室溫狀態，比如將冷凍的菌種解凍
第三將通過操作將保藏的菌種接種到培養基中培養，此步驟稱為菌種復壯
第四步挑選培養基茁壯的菌落，挑選其中部分菌落接種到新的培養基中培養，重復此步驟2-3次，從而得到生長良好的菌落經過這四個步驟就到達將菌種從保藏狀態活化的最終目的.
舉例大腸桿菌菌種活化方法：配活化培養基（LB）： 活化大腸桿菌配方：0.5g酵母粉，1g蛋白胨，1g氯化鈉，稀釋到100ml復蘇細胞（去掉DMSO及冷凍過程中產生的有毒物質）
材料：液氮中的細胞共1毫升：含20%血清（FBS），10%DMSO（防止細胞內產生冰晶），培養基
步驟：一、從液氮（約-190度）中取出細胞（管中有1ml細胞）（稍微抖掉液體）二、快速放入37度水浴1分鐘。三、加入1ml DMEM 培養基融化冰晶。四、全部移入離心管中，管口封口膜封口；五、離心：1200r/min，5min。六、去上清（用大槍（1-5ml）一次吸出，吸時沉淀朝上）；G2 細胞沉淀較明顯
七、先（用1ml 小槍）加到離心管中1 ml培養基并吹打吸出到培養瓶中，再加1 ml培養基潤洗離心管吸出到培養瓶中，然后用大槍加3ml培養基到培養瓶中（補足5毫升）；八、培養瓶放入37度溫箱。
用多少毫升95%的酒精能配成400毫升75%的酒精？
75%*400毫升=95%*未知數 未知數=約316毫升 |
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