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| 如何用甘油保存菌種的基本要求方法 | |||
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如何用甘油保存菌種的基本要求方法
1. 20%甘油保存菌種是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u滅菌l甘油后的甘油后,充分混勻后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)
2. 將一般細菌的菌種純化后接種于普通肉湯管，4～6h增菌后，加入適量甘油一生理鹽水保存液，-20℃冰箱保存；鏈球菌屬和奈瑟氏菌屬的菌株純化后接種于血清肉湯管，在5％～10％CO2中經8～10h增菌后，加入適量保存液，80℃低溫冰箱保存；真菌菌種純化后直接取菌洗入肉湯，不做培養，加入保存液后，-20℃冰箱保存。結果 在連續3年實驗期內，各菌種保存效果良好，且其形態結構、染色特性、生化反應等與標準株相符。結論 使用甘油生理鹽水保存法來保存菌種，各菌種保存時間長，方法簡便，特別是使鏈球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般實驗室得以保存。
3. 常用的是終濃度 10-30% 的甘油。由于純甘油十分粘稠，很難定量，一般配成終濃度 50% 的水溶液，高壓滅菌后室溫保存即可。使用時按 50% 甘油:菌液 = 1:1 混合均勻，然后迅速凍結。
A. 先把甘油稀釋成50%，然后滅菌這樣20%的終濃度用400微的菌體加600微的50%甘油混合不就可以啦純的甘油太粘稠啦，用槍不好吸的
B 終濃度15%。甘油配成80%的濃度，到時候加800微升菌體，200微升甘油就好。簡單的就在原來的培養基，如LB，或生理鹽水中加甘油，終濃度在20%左右，懸浮沉淀后裝小管扔冰箱凍起來就可以了。但時間不能太長，不要超過2~3個月，時間長了要重新活化、篩選。
甘油和水是互溶的，根本不是什么密封作用！甘油是為了防止冷凍結晶破壞細胞
冷凍干燥保藏法是菌種保藏最有效的方法之一冷凍干燥法是國內外一致認為比較理想的菌種保藏方法。冷凍真空干燥保藏法又稱冷凍干燥保藏法，簡稱凍干法。它通常是用保護劑制備擬保藏菌種的細胞懸液或孢子懸液于安瓿管中，再在低溫下快速將含菌樣凍結，并減壓抽真空，使水升華將樣品脫水干燥，形成完全干燥的固體菌塊。并在真空條件下立即融封，造成無氧真空環境，最后置于低溫下，使微生物處于休眠狀態，而得以長期保藏。常用的保護劑有脫脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物質。?由于此法同時具備低溫、干燥、缺氧的菌種保藏條件，因此保藏期長，一般達5～15年，存活率高，變異率低，是目前被廣泛采用的一種較理想的保藏方法。除不產孢子的絲狀真菌不宜用此法外，其他大多數微生物如病毒、細菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌等均可采用這種保藏方法。?保藏菌種需用時，可在無菌環境下開啟安瓿管，將無菌的培養基注入安瓿管中，固體菌塊溶解后，搖勻復水，然后將其接種于適宜該菌種生長的斜面上適溫培養即可。?
該法操作比較煩瑣，技術要求較高，且需要凍干機等設備。不適合酷友頻繁的求助菌種。我們實驗室保藏菌種，不管是細菌，放線菌還是霉菌和酵母，我們都是用的甘油管保藏。就是劃斜面得到單菌落，將單菌落置于液體培養基培養至對數期，在EP管中保存，菌液與甘油體積比為1：1，甘油要滅菌的。-20攝氏度保存即可。我們的菌種有保存七八年的依然能用。方便快捷。
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